蛋(dan)白質分離純化方法(fa)有哪些？

1、 鹽析

實驗原理：中和蛋(dan)白質表面電荷并破(po)壞水(shui)化膜。

蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)易溶于(yu)(yu)水(shui)(shui)，因為其(qi)分(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)的(de)-COOH -NH2和-OH都是(shi)(shi)親(qin)水(shui)(shui)基(ji)團，這些基(ji)團與(yu)極性水(shui)(shui)分(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)相互作用形(xing)成(cheng)(cheng)水(shui)(shui)化(hua)(hua)層，包圍于(yu)(yu)蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)分(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)周圍形(xing)成(cheng)(cheng)1~100 nm大小(xiao)的(de)親(qin)水(shui)(shui)膠體，從(cong)而(er)削弱了(le)蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)分(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)之間的(de)作用力。當大量鹽加到蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)溶液(ye)中，高濃(nong)度的(de)鹽離子(zi)(zi)(如硫酸銨的(de) SO42- 和NH4+)有很強的(de)水(shui)(shui)化(hua)(hua)力，可奪取蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)分(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)的(de)水(shui)(shui)化(hua)(hua)層，使之"失水(shui)(shui)"，于(yu)(yu)是(shi)(shi)蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)膠粒凝結并(bing)沉淀析(xi)出。

2、等電(dian)點沉(chen)淀(dian)法

實(shi)驗原(yuan)理：利(li)用蛋白(bai)質在等(deng)電點時溶解度*低而各種蛋白(bai)質又具有不(bu)同等(deng)電點的(de)特點進行分離的(de)方法。

在(zai)等(deng)電(dian)(dian)點時，蛋白質分子(zi)以兩性離子(zi)形式存在(zai)，其(qi)分子(zi)凈(jing)電(dian)(dian)荷(he)(he)為零(即正負電(dian)(dian)荷(he)(he)相(xiang)等(deng))，此時蛋白質分子(zi)顆(ke)(ke)粒在(zai)溶(rong)液中因沒有相(xiang)同電(dian)(dian)荷(he)(he)的相(xiang)互排斥，分子(zi)相(xiang)互之間的作用力減(jian)弱，其(qi)顆(ke)(ke)粒極易(yi)碰撞、凝(ning)聚而產(chan)生(sheng)沉(chen)淀(dian)，所以蛋白質在(zai)等(deng)電(dian)(dian)點時，其(qi)溶(rong)解(jie)度(du)*小，*易(yi)形成沉(chen)淀(dian)物。

注意點：不(bu)(bu)(bu)同的(de)蛋白(bai)質，具(ju)有(you)不(bu)(bu)(bu)同的(de)等電(dian)點。同一種(zhong)蛋白(bai)質在不(bu)(bu)(bu)同條件下，等電(dian)點不(bu)(bu)(bu)同。

3、有機溶劑沉淀法

實驗原理：加入(ru)有機(ji)溶劑使水(shui)溶液的介電常(chang)數降低，因而(er)增加了(le)兩個相反電荷基團(tuan)之間的吸引力，促進(jin)了(le)蛋(dan)白質分子的聚集和沉淀。

有(you)機溶劑(ji)引起蛋(dan)白(bai)質沉淀的另一種解釋認為(wei)與鹽析相似(si)，有(you)機溶劑(ji)與蛋(dan)白(bai)質爭(zheng)奪水(shui)(shui)化水(shui)(shui)，致使(shi)蛋(dan)白(bai)質脫(tuo)除(chu)水(shui)(shui)化膜，而易于聚集形成沉淀。

影響(xiang)因素(su)：(1)有機溶劑的選擇 (2)溫度的控制 (3)pH值(zhi) (4)離(li)子強(qiang)度

用(yong)(yong)此法析出的(de)沉(chen)淀一(yi)般比鹽析法易過濾或(huo)(huo)離心沉(chen)降，分離后的(de)蛋白(bai)質沉(chen)淀應立即用(yong)(yong)水或(huo)(huo)者緩沖液溶(rong)解，以達(da)到降低有機溶(rong)劑的(de)濃度的(de)目的(de)。此法在血液制品的(de)制備過程中較多使用(yong)(yong)。