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超微量光度計的蛋白質直接定量
日期：2024-10-23 01:14
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摘要：超微量光度計的蛋白質直接定量
超微(wei)量光度計已(yi)成為(wei)現(xian)代分子生(sheng)物實驗室常規儀器。常用(yong)于核酸(suan)，蛋白定量以及生(sheng)長濃(nong)度的定量。
這(zhe)種方(fang)法是在280nm波(bo)長，直(zhi)接測試(shi)(shi)(shi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)。選擇Warburg 公式(shi)(shi)(shi)，光度(du)(du)(du)(du)計可以直(zhi)接顯示(shi)出樣品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)，或者(zhe)是選擇相應的(de)(de)(de)(de)(de)(de)換算方(fang)法，將吸光值(zhi)轉(zhuan)換為(wei)樣品(pin)濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)。蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)測定(ding)過(guo)程(cheng)非常(chang)簡單(dan)，先測試(shi)(shi)(shi)空白(bai)(bai)液，然后(hou)直(zhi)接測試(shi)(shi)(shi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)。由于(yu)緩(huan)沖液中存在一(yi)些雜(za)質(zhi)(zhi)，一(yi)般要消除(chu)320nm 的(de)(de)(de)(de)(de)(de)“背景”信息(xi)，設(she)定(ding)此功能“開”。與測試(shi)(shi)(shi)核(he)酸類似(si)，要求A280的(de)(de)(de)(de)(de)(de)吸光值(zhi)至少(shao)(shao)大(da)(da)于(yu)0.1A，合適(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)線性范圍(wei)在1.0-1.5 之間。實(shi)驗中選擇Warburg 公式(shi)(shi)(shi)顯示(shi)樣品(pin)濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)時，發現讀(du)數“漂移(yi)”。這(zhe)是一(yi)個正常(chang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)現象。事實(shi)上，只要觀察(cha)A280的(de)(de)(de)(de)(de)(de)吸光值(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)變(bian)化(hua)范圍(wei)不超過(guo)1%，表明結果非常(chang)穩(wen)定(ding)。漂移(yi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)原因(yin)是因(yin)為(wei)Warburg 公式(shi)(shi)(shi)吸光值(zhi)換算成濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)，乘以一(yi)定(ding)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)系數，只要吸光值(zhi)有少(shao)(shao)許改變(bian)，濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)就會被放大(da)(da)，從而顯得結果很(hen)不穩(wen)定(ding)。蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)直(zhi)接定(ding)量(liang)方(fang)法，適(shi)合測試(shi)(shi)(shi)較純凈、成分相對單(dan)一(yi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)。紫外(wai)直(zhi)接定(ding)量(liang)法相對于(yu)比色法來說，速度(du)(du)(du)(du)快，操作(zuo)簡單(dan)；但是容易(yi)受到平行物(wu)質(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)干(gan)擾，如DNA的(de)(de)(de)(de)(de)(de)干(gan)擾；另外(wai)敏感度(du)(du)(du)(du)低(di)，要求蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)較高。