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植物染色體DNA的抽取及濃度測定說明

日期:2024-10-22 23:11
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摘要:

 
、原理
植物組織中大部分是核DNA,它和組蛋白、非組蛋白結合在起,以核蛋白的形式存在于細胞核內。CTAB:是種陽離子去污劑,
可溶解細胞膜,它能與核酸形成復合物,在鹽溶劑中(0.7mol/L NaCl)是可溶的,當降低溶劑鹽的濃度到定程度(0.3mol/L NaCl)
時從溶劑中沉淀,通過離心就可將CTAB與核酸的復合物同蛋白、多糖類物質分開,然后將CTAB與核酸的復合物沉淀溶解于鹽溶劑中,
再加入乙醇使核酸沉淀,CTAB能溶解于乙醇中。
在DNA提取過程中必須始終注意以下幾個關鍵問題:
(1)DNA的結構和雙鏈易受多種因素的影響引起雙鏈解開,即“變性”,因此抽提時避免使用變性的條件。
(2)抑制內外源DNase的活力。DNase就象把刀,它能把大分子的DNA切成碎片,所以要加以杜,現可以通過多種途徑來做到這點:a、
低溫操作;b、調節pH,使偏堿(pH8.0);c、抽提液中加表面活性劑;d、加螯合劑(EDTA)除去酶的鋪助因子(Mg2+),使酶活性喪失。
(3)防止化學降解。如過酸或過堿以及其它化學因素,會使DNA降解,般綜合考慮,取pH8.0左右為宜。
(4)防止物理因素降解。如溫度太或機械張力剪切等,DNA分子特別大,其分子量可達1012道爾頓,易被機械張力拉斷,甚至在細管中稍急
些的流動也會使DNA斷裂,所以在抽提過程中要特別注意這點,操作過程要盡量簡便、溫和、減少攪拌次數,也不要劇烈搖動。
(5)植物的次生代謝物對核酸提取有干擾作用。因此,般盡可能選幼嫩的、代謝旺盛的新生組織作為提取DNA的材料,這是因幼嫩的新生組織
次生代謝物較少,DNA含量,且易于破碎,植物材料好是新鮮的。
分離提取植物DNA的方法很多,本實驗采用CTAB法提取DNA并通過紫外吸收法和電泳鑒定。