PCR的原理：

    DNA的(de)半保留復(fu)制(zhi)是(shi)生(sheng)物進化和傳代(dai)的(de)重(zhong)要途徑。雙鏈(lian)(lian)(lian)DNA在多種酶(mei)的(de)作用下(xia)可以(yi)變性(xing)解鏈(lian)(lian)(lian)成(cheng)(cheng)單(dan)鏈(lian)(lian)(lian)，在DNA聚(ju)(ju)合(he)酶(mei)的(de)作用下(xia)，以(yi)單(dan)鏈(lian)(lian)(lian)為(wei)(wei)模版，根據堿基互補(bu)配對(dui)原則復(fu)制(zhi)成(cheng)(cheng)新的(de)單(dan)鏈(lian)(lian)(lian)，與(yu)模版配對(dui)成(cheng)(cheng)為(wei)(wei)雙鏈(lian)(lian)(lian)分子挎貝。在體外實驗(yan)中發現(xian)，DNA在溫時(shi)也可以(yi)發生(sheng)變性(xing)解鏈(lian)(lian)(lian)，當溫度降(jiang)低(di)后又可以(yi)復(fu)性(xing)成(cheng)(cheng)為(wei)(wei)雙鏈(lian)(lian)(lian)。因(yin)(yin)此，通過溫度變化控(kong)制(zhi)DNA的(de)變性(xing)和復(fu)性(xing)，并(bing)設計與(yu)模板(ban)DNA的(de)5’端結合(he)的(de)兩條引物，加入DNA聚(ju)(ju)合(he)酶(mei)、dNTP就(jiu)可以(yi)完成(cheng)(cheng)特定基因(yin)(yin)的(de)體外復(fu)制(zhi)，多次(ci)重(zhong)復(fu)“變性(xing)解鏈(lian)(lian)(lian)—退火—合(he)成(cheng)(cheng)延伸”的(de)循環就(jiu)可以(yi)以(yi)幾何數(shu)大量(liang)擴(kuo)增(zeng)特定的(de)基因(yin)(yin)。

   從PCR原理可以看出(chu)(chu)，PCR儀(yi)的(de)(de)關鍵是升降溫的(de)(de)步(bu)驟(zou)。現在(zai)偶爾還能(neng)聽到些前輩們(men)笑(xiao)談(tan)早年的(de)(de)PCR實驗如何(he)在(zai)3個水(shui)浴鍋(guo)中完成的(de)(de)趣聞。經過(guo)不斷改進，今天(tian)的(de)(de)PCR已經越(yue)來(lai)越(yue)完善和智能(neng)化(hua)。出(chu)(chu)于市場推廣(guang)的(de)(de)戰略(lve)需要，各(ge)廠的(de)(de)PCR儀(yi)型號不同，著力宣傳的(de)(de)技(ji)術指標(biao)和參(can)數也不盡統，天(tian)呈在(zai)這里簡單列出(chu)(chu)選購時(shi)我們(men)認為(wei)應該考慮的(de)(de)常用指標(biao)，希望(wang)有(you)助于大選購PCR儀(yi)的(de)(de)選購技(ji)巧。

PCR儀的種類：

    PCR儀(yi)的種類(lei)總體(ti)來說可以分為兩(liang)大類(lei)：PCR擴(kuo)增儀(yi)和(he)實時熒光定量(liang)PCR儀(yi)，普通的PCR擴(kuo)增儀(yi)又衍(yan)生出帶梯(ti)度(du)PCR功(gong)能的梯(ti)度(du)PCR儀(yi)、和(he)帶原位擴(kuo)增功(gong)能的原位PCR儀(yi)等(deng)等(deng)。

    PCR重(zhong)要的(de)(de)就是個升降溫(wen)過程，初(chu)的(de)(de)水(shui)浴(yu)鍋式PCR，就是三個水(shui)浴(yu)箱，個機械臂(bei)，定(ding)時抓出反應槽轉換水(shui)浴(yu)鍋。這種儀器(qi)體積大，迅速慢，但其實(shi)結果并(bing)不比以后的(de)(de)PCR儀差。后來有人利(li)用致冷和加熱做成了(le)，固定(ding)位(wei)置升降溫(wen)的(de)(de)PCR擴增儀。

    后來(lai)隨著定(ding)量技(ji)術的(de)發(fa)展(zhan)，有公司(si)將擴增儀和(he)檢(jian)測(ce)做成體(ti)，也(ye)就(jiu)成了現在(zai)的(de)實時(shi)熒(ying)光定(ding)量PCR儀。1996年由ABI公司(si)先推(tui)出將擴增和(he)檢(jian)測(ce)融為體(ti)的(de)實時(shi)熒(ying)光定(ding)量PCR儀。

PCR儀的選購：

、溫度控制
 ;   對普通PCR儀來說，溫(wen)度控(kong)制(zhi)主要是(shi)(shi)(shi)介質問題，理想的介質是(shi)(shi)(shi)導熱性(xing)好、比(bi)熱大(da)、接觸緊密的物質。溫(wen)控(kong)指(zhi)標(biao)主要是(shi)(shi)(shi)指(zhi)溫(wen)度的準確性(xing)、均(jun)勻(yun)性(xing)、以及升降溫(wen)速度，對梯度PCR儀來說，除了溫(wen)度的準確性(xing)和均(jun)勻(yun)性(xing)、升降溫(wen)速度以外(wai)，還必須(xu)考慮(lv)儀器在(zai)梯度模式(shi)和標(biao)準模式(shi)下是(shi)(shi)(shi)否具有(you)同樣(yang)的溫(wen)度特(te)性(xing)。關于(yu)溫(wen)度控(kong)制(zhi)方面(mian)，作者將在(zai)以后的技術文(wen)章(zhang)里(li)詳(xiang)細(xi)介紹。

、儀器的功能性和人性化設計
     當然是(shi)越簡(jian)單方(fang)便的設計符合(he)用戶的要(yao)求。

熱蓋——現在(zai)的(de)(de)(de)PCR儀般均(jun)配備熱(re)(re)(re)(re)蓋(gai)(gai)，熱(re)(re)(re)(re)蓋(gai)(gai)溫度(du)設為105℃，使樣(yang)(yang)品(pin)管(guan)(guan)頂部(bu)的(de)(de)(de)溫度(du)達到(dao)105℃左右，蒸(zheng)發的(de)(de)(de)反(fan)應(ying)液就不(bu)會(hui)產生凝集在(zai)管(guan)(guan)蓋(gai)(gai)上而改變(bian)反(fan)應(ying)體積(ji)，這樣(yang)(yang)用戶就無需再向反(fan)應(ying)管(guan)(guan)內加(jia)石蠟油，直接減少后(hou)(hou)繼反(fan)應(ying)的(de)(de)(de)麻(ma)煩。如(ru)(ru)(ru)果是(shi)旋轉加(jia)壓的(de)(de)(de)熱(re)(re)(re)(re)蓋(gai)(gai)就要特(te)別(bie)小心，因為壓力(li)到(dao)達時(shi)沒有明(ming)顯的(de)(de)(de)提示，用戶需要根(gen)據經驗將熱(re)(re)(re)(re)蓋(gai)(gai)旋到(dao)合適位置，不(bu)太容易掌握。如(ru)(ru)(ru)果過(guo)松，熱(re)(re)(re)(re)蓋(gai)(gai)沒有充分接觸反(fan)應(ying)管(guan)(guan)而影響結果；如(ru)(ru)(ru)果過(guo)緊，則會(hui)導致反(fan)應(ying)管(guan)(guan)變(bian)形，甚至可能造成熱(re)(re)(re)(re)蓋(gai)(gai)的(de)(de)(de)機械故障(zhang)。新的(de)(de)(de)ESP技術是(shi)指(zhi)熱(re)(re)(re)(re)蓋(gai)(gai)加(jia)熱(re)(re)(re)(re)時(shi)不(bu)接觸樣(yang)(yang)品(pin)管(guan)(guan)，避免加(jia)熱(re)(re)(re)(re)樣(yang)(yang)品(pin)管(guan)(guan)導致非特(te)異產物，等加(jia)熱(re)(re)(re)(re)到(dao)設定(ding)溫度(du)后(hou)(hou)熱(re)(re)(re)(re)蓋(gai)(gai)下降，將樣(yang)(yang)品(pin)管(guan)(guan)壓入加(jia)熱(re)(re)(re)(re)模塊，下降時(shi)間和壓力(li)都由(you)電子(zi)控制(zhi)。

樣品基座——PCR反(fan)應(ying)多在0.2或(huo)(huo)者0.5的(de)(de)管(guan)子(zi)中(zhong)進行，多數PCR儀(yi)也配(pei)(pei)備了不(bu)(bu)(bu)(bu)同(tong)的(de)(de)可(ke)更(geng)換(huan)樣(yang)品(pin)槽適配(pei)(pei)不(bu)(bu)(bu)(bu)同(tong)的(de)(de)樣(yang)品(pin)管(guan)。eppendorf有(you)個(ge)有(you)趣(qu)的(de)(de)設計，個(ge)槽內帶(dai)有(you)0.2和0.5兩(liang)種(zhong)不(bu)(bu)(bu)(bu)同(tong)樣(yang)品(pin)孔(kong)，不(bu)(bu)(bu)(bu)需更(geng)換(huan)基座(zuo)就可(ke)以分別(bie)使用(yong)兩(liang)種(zhong)不(bu)(bu)(bu)(bu)同(tong)的(de)(de)反(fan)應(ying)管(guan)，或(huo)(huo)者96孔(kong)板，加原(yuan)位適配(pei)(pei)器就可(ke)以變成原(yuan)位PCR了。避免了換(huan)基座(zuo)的(de)(de)麻煩。當(dang)然不(bu)(bu)(bu)(bu)同(tong)的(de)(de)反(fan)應(ying)管(guan)不(bu)(bu)(bu)(bu)可(ke)以同(tong)時使用(yong)的(de)(de)，因為度(du)不(bu)(bu)(bu)(bu)同(tong)，熱蓋(gai)不(bu)(bu)(bu)(bu)能作用(yong)。ABI的(de)(de)9700就可(ke)以更(geng)換(huan)不(bu)(bu)(bu)(bu)同(tong)的(de)(de)樣(yang)品(pin)槽，樣(yang)品(pin)槽系列擴增到(dao)(dao)從0.5到(dao)(dao)標準96孔(kong)，到(dao)(dao)雙384孔(kong)板，分別(bie)適合不(bu)(bu)(bu)(bu)同(tong)的(de)(de)需要，相當(dang)靈活。

軟件——新(xin)的(de)PCR儀(yi)都(dou)比較注重程(cheng)序編寫(xie)的(de)簡易性(xing)。大(da)屏幕，顯示(shi)實(shi)時信息(xi)，***，記憶存(cun)儲(chu)(chu)多(duo)個程(cheng)序、自(zi)動斷電(dian)保護等都(dou)有助于實(shi)驗室(shi)(shi)中的(de)復雜環境(jing)使(shi)用。程(cheng)序儲(chu)(chu)存(cun)方面(mian)，有人覺(jue)得儲(chu)(chu)存(cun)程(cheng)序的(de)多(duo)少(shao)似乎意(yi)義不太大(da)，但是對于實(shi)驗人員多(duo)、PCR儀(yi)每天運作頻繁的(de)實(shi)驗室(shi)(shi)來說，每個使(shi)用者獨立儲(chu)(chu)存(cun)自(zi)定(ding)義的(de)PCR程(cheng)序，確實(shi)能(neng)方便下次的(de)調用，會節約些(xie)時間。

    綜(zong)合(he)考(kao)慮，臺PCR儀選購(gou)的關鍵還是在(zai)于用戶(hu)自己的要求，有些功(gong)能可能都用不上(shang)或很少用，用戶(hu)需要仔細(xi)斟酌，畢竟(jing)是分錢分貨。