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超聲破碎細胞常見問題
如果是基質菌絲的話,好可以考慮用溶菌酶處理下。
般來講這幾種方法讀可以的:
,液氮研磨
,用french press破碎
三,超聲波破碎
四,溶菌酶處理預處理
為什么用塑料大試管,玻璃的不可以嗎?
答:不可以的。那么先讓我來解釋下超聲波細胞粉碎儀超聲破碎的原理吧。
超聲波是物質介質中的種彈性機械波,它既是種波動形式,又是種能量形式。超聲對細胞的作用主要有熱效應,空化效應和機械效應。熱效應是當超聲在介質中傳播時,摩擦力阻礙了由超聲引起的分子震動,使部分能量轉化為局部熱。空化效應是在超聲照射下,生物體內形成空泡,隨著空泡震動和其猛烈的聚爆而產生出機械剪切壓力和動蕩。另外,空化泡破裂時產生瞬時溫壓,可使水蒸氣熱解離產生.OH自由基和.H原子,由.OH自由基和.H原子引起的氧化還原反應可導致多聚物降解、酶失活、脂質過氧化和細胞殺傷。機械效應是超聲的原發效應,超聲波在傳播過程中介質質點交替地壓縮與伸張構成了壓力變化,引起細胞結構損傷。損傷作用的強弱與超聲的頻率和強度密切相關。所以如果使用玻璃管,可能會碎裂,而通常使用的是塑料試管。
100g大腸桿菌溶于1L破碎液里,攪拌發現菌液發粘,菌體不能夠很好分散,用超聲波細胞粉碎儀破碎,加壓后,菌液不能進入勻質機,速度很慢,請問是何原因?能有好的辦法解決,很好用勻質機快速破碎菌體?
答:將破碎液的量加大,不能很好分散可能是量太大 ,超聲處理5-10分鐘,菌液粘度即可大大降低,也可促進菌體分散。不同型號的超聲波細胞破碎儀功率不樣,功率的大小決定了使用變幅桿的大小范圍,你使用多大的變幅桿就在設備的上調至該刻度!變幅桿的大小決定了處理量5ml下選3mm,5~50ml可選6~8mm,50ml以上選10mm的變幅桿,依此類推!
酵母破碎的問題
答:般的(de)(de)(de)(de)PROTOCOL都是用(yong)超聲波細(xi)胞破碎儀(yi)破碎酵(jiao)母細(xi)胞sigma G-8772 酵(jiao)母破碎效(xiao)果(guo)好的(de)(de)(de)(de)我(wo)(wo)所做過(guo)的(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)中(zhong)還(huan)是玻璃珠,效(xiao)率很,而且對目的(de)(de)(de)(de)蛋(dan)白活(huo)性不(bu)會有什么影響(xiang)。般應該用(yong)這(zhe)個方(fang)法(fa)。 化學裂(lie)解(jie)的(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa),10g酵(jiao)母 加1ml的(de)(de)(de)(de)乙酸乙酯,充分攪拌至液(ye)體(ti)狀。此法(fa)的(de)(de)(de)(de)裂(lie)解(jie)效(xiao)果(guo)不(bu)錯(cuo)的(de)(de)(de)(de)加尿素裂(lie)解(jie)液(ye),在破碎遇到(dao)的(de)(de)(de)(de)問題是菌體(ti)濃(nong)度(du)太低,OD620nm在4-6之間。細(xi)胞破碎儀(yi)的(de)(de)(de)(de)低破碎體(ti)積為4ml左右(you),這(zhe)樣我(wo)(wo)再稀釋(shi)倍,我(wo)(wo)懷疑破碎完溶出蛋(dan)白和酶(mei)活(huo)測定時會測不(bu)準。破碎后(hou),你可將液(ye)體(ti)放(fang)入透析(xi)袋中(zhong)濃(nong)縮
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